Ventilasi satu paru (OLV) adalah mode khusus ventilasi mekanis untuk pembedahan toraks; namun, hal itu pasti menghasilkan beberapa efek samping sementara memungkinkan kedua paru-paru untuk diventilasi secara terpisah dan menyediakan kondisi yang nyaman untuk pembedahan. Dalam pekerjaan anestesi klinis, cedera paru-paru yang diinduksi OLV telah mendapat perhatian yang meningkat, tetapi patogenesis cedera paru-paru yang diinduksi OLV belum dijelaskan. Dalam beberapa tahun terakhir, apoptosis memainkan peran penting dalam cedera jaringan paru-paru, dan beberapa penelitian telah menyarankan terjadinya apoptosis sel epitel alveolar pada tahap awal ventilasi mekanis [1], sementara studi tentang apoptosis pada jaringan paru-paru selama OLV jarang dilaporkan. Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mempelajari ekspresi indeks apoptosis dan faktor eksekusi apoptosis Caspase-3 di jaringan paru-paru selama OLV dan untuk menganalisis hubungan antara perubahannya dan cedera paru-paru yang disebabkan oleh OLV. Huang Bing, Departemen Anestesiologi, Rumah Sakit Kanker, Universitas Kedokteran Guangxi
Bahan dan metode
Kelompok hewan Empat puluh dua tikus jantan SD yang sehat, dengan berat 200-250 g (disediakan oleh Pusat Hewan Eksperimental Universitas Kedokteran Guangxi). Tikus dibagi menjadi kelompok kontrol kosong (kelompok C), kelompok kontrol ventilasi paru-paru ganda (kelompok B), dan kelompok ventilasi paru-paru tunggal (kelompok A). kelompok C adalah kelompok pernapasan spontan, dan kelompok A dan B dibagi menjadi tiga subkelompok: kelompok A1 (OLV 0. 5 jam, dimulainya kembali ventilasi 0. 5 jam, dimulainya kembali ventilasi 0,5 jam), kelompok A2 (OLV 1 jam, dimulainya kembali ventilasi 0,5 jam), kelompok A3 (OLV 1,5 jam, dimulainya kembali ventilasi 0,5 jam) dan kelompok B1 (ventilasi paru-paru ganda 1 jam), kelompok B2 (1,5 jam ventilasi paru-paru ganda), dan kelompok B3 (2 jam ventilasi paru-paru ganda). Tikus-tikus tersebut ditugaskan secara acak, enam tikus di setiap kelompok, total tujuh kelompok.
Persiapan model Tikus kelompok A dibius dengan ketamin 80mg / kg, dan Simeon II 0,6 ~ 0,8ml / kg secara intramuskular, trakeotomi dilakukan dan tabung trakea buatan sendiri dimasukkan ke trakea utama, vecuronium bromide diberikan 2mg / kg, dan ketika respirasi menjadi pingsan, ventilator (Jiangwan tipe I ventilator hewan miniatur) dihubungkan untuk ventilasi mekanis. Volume tidal (VT): 10 ml/kg, laju pernapasan (RR): 60 kali/menit. Dada dibuka di ruang interkostal kelima di sisi kiri, paru-paru kiri terpapar, tabung trakea dimasukkan terlalu dalam ke bronkus kanan, parameter ventilasi disesuaikan VT: 5-6 ml / kg, RR: 80 kali / menit. Pada kelompok B, setelah paru-paru kiri terpapar, kedua paru-paru tetap berventilasi sampai waktu yang dijadwalkan.
Spesimen dikumpulkan dari tikus kelompok C setelah anestesi dan dengan cepat dikeluarkan dari arteri karotis, sedangkan pada kelompok A dan B, hewan-hewan tersebut dikeluarkan dari arteri karotis segera setelah ventilasi hingga waktu yang telah ditentukan. Jaringan yang tersisa dari lobus bawah paru-paru kiri diambil dan disimpan pada suhu -80 ℃ dalam lemari es bersuhu sangat rendah untuk pemeriksaan.
Item dan metode deteksi Perubahan morfologis dan struktural jaringan paru-paru diamati di bawah mikroskop cahaya pewarnaan HE; Ekspresi protein Caspase-3 dalam jaringan paru-paru dideteksi dengan imunoblotting, dan gambar pita protein reaksi Western blot setelah pemindaian film dianalisis dengan sistem analisis gambar gel Image Lab, dan nilai skala abu-abu dari pita target dihitung untuk setiap kelompok pita protein target dan referensi internal Rasio nilai skala abu-abu dari setiap pita protein target dengan nilai skala abu-abu dari pita protein GAPDH referensi internal dihitung; Indeks apoptosis jaringan paru-paru dideteksi dengan pewarnaan pelabelan akhir in situ (TUNEL) (10 bidang yang tidak digandakan dipilih untuk setiap bagian, dan sel-sel positif diwarnai dengan inti kuning kecoklatan.
Analisis statistik Analisis statistik dilakukan dengan paket perangkat lunak SPSS13.0, dan data pengukuran dinyatakan sebagai rata-rata ± standar deviasi (x (_) ± s). ANOVA satu arah digunakan untuk perbandingan antar subkelompok, dan uji LSD-t digunakan untuk perbandingan dua arah antar kelompok. Uji-t digunakan untuk membandingkan sampel antara subkelompok yang sesuai; P <0,05 dianggap sebagai perbedaan yang signifikan secara statistik.
Hasil
Penebalan interstitium terlihat jelas.
Pewarnaan TUNEL Tidak ada sel apoptosis yang terlihat pada jaringan paru-paru kelompok C; sejumlah kecil sel apoptosis terlihat pada jaringan paru-paru kelompok B pada 2 jam ventilasi di kedua paru-paru. Indeks apoptosis secara signifikan lebih tinggi pada kelompok A3 dibandingkan dengan kelompok B3 (P <0,05).
Kandungan protein Caspase-3 dalam jaringan paru Dibandingkan dengan kelompok C, tidak ada perubahan signifikan dalam kandungan protein Caspase-3 pada kelompok A1 (P> 0,05), dan ekspresi meningkat pada kelompok A2 dan A3 (P <0,05), dan dengan perpanjangan waktu ventilasi, kelompok C = kelompok A1 < kelompok A2 < kelompok A3 (P <0. 05); dibandingkan dengan subkelompok kelompok B, perbedaan antara kelompok A1 dan B1 tidak signifikan secara statistik Dibandingkan dengan subkelompok kelompok B, perbedaan antara kelompok A1 dan B1 tidak signifikan secara statistik (P ＞ 0,05), dan ekspresi pada kelompok A2 dan A3 meningkat dibandingkan dengan kelompok B2 dan B3 yang sesuai (P ＜ 0,05).
Tabel 1 Perbandingan indeks apoptosis dan ekspresi protein Caspase-3 dalam jaringan paru-paru tikus antar kelompok (n = 6, `x ± s)
Indeks deteksi
Kelompok C
Kelompok A1
Kelompok A2
Kelompok A3
Kelompok B1
Kelompok B2
Kelompok B3
AI (%)
0.12±0.08
0.13±0.08
6,17±0,75 ab
16.00±1.10 ab
0.15±0.10
0.18±0.08
4.83±0.75 a
Caspase-3
0.21±0.02
0.22±0.02
0.34±0.01ab
0.69±0.01ab
0.22±0.01
0.23±0.01
0.28±0.01a
aP<0,05 dibandingkan dengan kelompok C; bP