Metode tonik adalah pengobatan yang umum digunakan untuk tumor. Di klinik, terdapat perdebatan mengenai apakah ada keuntungan atau kerugian dalam mengobati tumor dengan metode pengobatan ini. Sebagian besar ahli percaya bahwa obat tonik dapat menghambat pertumbuhan tumor, memperpanjang kelangsungan hidup pasien dan meningkatkan kualitas hidup mereka [1]; sementara beberapa dokter percaya bahwa obat tonik akan meningkatkan pertumbuhan tumor dan tidak boleh digunakan lebih sering dalam praktik klinis. Untuk mengeksplorasi efek obat tonik pada tumor, kami memilih formula perwakilan tonik Sijunzi Tang untuk mengamati pengaruhnya terhadap tingkat penghambatan tumor dan induksi apoptosis sel tumor pada tikus hormonal. 1. Bahan dan metode 1.1 Hewan percobaan 60 ekor tikus jenis Kunming, dengan berat 20 g ± 2 g, setengah jantan dan setengah betina, dibeli dari Pusat Hewan Percobaan Universitas Kedokteran Militer Pertama. Tikus-tikus tersebut dipelihara di kandang terpisah, diberi makan dan minum secara bebas, dan ruang tikus diberi ventilasi. 1.2 Garis sel Garis sel adalah strain tumor asites tikus SRS-82, inokulasi subkutan dapat menghasilkan sarkoma. Garis sel disediakan oleh Institute of Pharmaceutical Research of the University of China, dan secara rutin diresusitasi dan dikultur. 1.3 Persiapan obat Obat-obatan yang digunakan dalam percobaan ini dibeli dari apotek Rumah Sakit Nanfang, dan injeksi 5-FU diproduksi oleh Pabrik Umum Farmasi Jiangsu Nantong (Karantina Farmasi Su Wei No. 241201). Komposisi Sijunzi Tang: ginseng 9g, Atractylodes macrocephala 9g, Poria 9g, Radix et Rhizoma Glycyrrhizae 6g. Persiapan: rebusan air konvensional dua kali, rebusan yang dihasilkan diuapkan dan dipekatkan dengan penangas air bersuhu konstan pada suhu 70℃, dan konsentrasi akhir cairan Sijunzi Tang diperoleh 0,33 g / ml (mengandung obat mentah), yang disimpan dalam lemari es pada suhu 4℃. Injeksi 5-FU diencerkan hingga 3mg / ml dalam larutan garam steril dan disimpan dalam lemari es 4 ℃. 1.4 Pembentukan model tikus tumor yang dimuat Kultur resusitasi in vitro sel SRS-82, kumpulkan sel dalam fase pertumbuhan eksponensial sel, sentrifugasi pada 1000r / menit, cuci dua kali dengan PBS, sentrifugasi untuk menghilangkan supernatan, dan encerkan dengan saline steril, disesuaikan dengan 2 ~ 3 × 106 / ml. 10 mencit Kunming yang sehat dipilih secara acak, dan masing-masing disuntik secara intraperitoneal dengan 0,4 ml suspensi sel yang disebutkan di atas, dan perhatian diberikan pada pengamatan yang diinokulasi Setelah sekitar satu minggu, perut tikus yang diinokulasi terlihat jelas membuncit dan menonjol, dan asites diekstraksi, yang berwarna putih susu, kemudian diencerkan dengan larutan garam steril dengan perbandingan 1: 2 dalam tabung reaksi steril, dan akhirnya diperoleh sekitar 15 ml larutan pengenceran asites. Pengenceran asites di atas digunakan untuk menginokulasi 36 mencit Kunming, dan masing-masing diinokulasi secara subkutan dengan 0,2 ml pengenceran di tungkai belakang kanan. 1.5 Pengelompokan eksperimental dan pemberian obat 36 ekor mencit dengan pemodelan yang berhasil dibagi secara acak menjadi 3 kelompok yang masing-masing terdiri dari 12 ekor mencit dan diberi nomor di dalam kelompok, 3 kelompok tersebut adalah: kelompok kontrol kosong, kelompok Sijunzi Tang, dan kelompok 5-FU. Semua perlakuan dimulai dari hari kedua setelah pemodelan, kelompok Sijunzi Tang diinduksi dengan rebusan Sijunzi Tang yang telah disiapkan, masing-masing 0,5 ml, sekali sehari; kelompok kontrol kosong diinduksi dengan larutan garam dalam jumlah yang sama setiap hari; dan kelompok 5-FU disuntikkan secara intraperitoneal dengan injeksi 5-FU yang telah diencerkan, masing-masing 0,2 ml, dua hari sekali. Setelah perawatan di atas dilakukan terus menerus selama 15 hari, tikus dibunuh dan tumor dikupas. 1.6 Menimbang tumor dan menghitung laju penghambatan tumor Blok tumor dikupas, ditimbang dengan timbangan elektronik dan laju penghambatan tumor dihitung menurut rumus konvensional. 1.7 Pengamatan mikroskop elektron transmisi terhadap morfologi dan struktur sel tumor Dua ekor tikus diambil secara acak dari setiap kelompok untuk pengamatan mikroskop elektron. Setelah pengupasan tumor, 0,5 mm3 volume jaringan tumor dipotong dan segera difiksasi dengan glutaraldehid. Setelah dehidrasi, infiltrasi, penyematan, pemotongan, pewarnaan, dan langkah-langkah lainnya, bagian mikroskop elektron yang dibuat dengan baik diamati di bawah mikroskop elektron transmisi. 1.8 Elektroforesis gel agarosa Setelah menyiapkan reagen, DNA diekstraksi dan dilakukan elektroforesis. Elektroforesis agarosa 1%, voltase 60V, waktu elektroforesis 1,5 jam. 1.9 Pemrosesan statistik Semua data diproses dengan SPSS10.0, dan analisis varians (ANOVA) digunakan dengan desain acak. 2, Hasil 2.1 Berat tumor dan tingkat penghambatan tumor Berat tumor dan tingkat penghambatan tumor dari masing-masing kelompok ditunjukkan pada Tabel 1. Seperti yang dapat dilihat dari tabel, berat tumor dari setiap kelompok yang diberikan secara signifikan berkurang dibandingkan dengan kelompok kontrol kosong, di antaranya efek penekanan tumor dari kelompok 5-FU adalah yang paling jelas, dengan berat tumor yang paling ringan (P<0,01); Sup Tetrandrin juga memiliki efek penekanan tumor yang jelas (P<0,05). Tabel 1 Rata-rata berat tumor dan tingkat penghambatan tumor dari masing-masing kelompok Kelompok eksperimen Berat tumor (g) (х±s) Tingkat penghambatan tumor (%) Kelompok kontrol kosong 4.78±1.53 Kelompok kaldu Sijunzi 4.03±1.23* 15.69 Kelompok 5-FU 3.12±1.08** 34.1 *P<0.05 vs kelompok kosong, **P<0.01 vs 2.2 Pengamatan mikroskop elektron transmisi Berat tumor kelompok kaldu Sijunzi dan kelompok 5-FU paling jelas (P<0.01). Sebagian besar bagian dalam kelompok dan kelompok 5-FU menunjukkan perubahan sel nekrotik: pewarnaan pucat pada kromatin, pembengkakan organel, dan perubahan seperti vakuola. Kedua kelompok tidak menunjukkan sejumlah besar sel yang mengalami perubahan karakteristik apoptosis. 2.3 Elektroforesis gel agarosa Pita seperti tangga DNA adalah perubahan karakteristik sel yang mengalami apoptosis, dan pita elektroforesis elektroforesis DNA tidak terlihat pada kelompok Sijunzi Tang dan kelompok 5-FU dengan pita seperti tangga yang jelas. 3. Diskusi Hasil percobaan menunjukkan bahwa berat tumor kelompok Sijunzi Tang berkurang secara signifikan dibandingkan dengan kelompok blanko, yang menunjukkan bahwa formula tersebut memiliki efek positif dalam menghambat ukuran tumor dan bermanfaat untuk aplikasi klinis dalam pengobatan tumor. Morfologi sel apoptosis adalah inti yang kompak dan sitoplasma yang terkompresi pada tahap awal, dan kemudian inti terfragmentasi dan berkembang menjadi vesikula apoptosis, tetapi organel lainnya tetap utuh. Fitur biokimia yang paling mencolok adalah pembelahan ikatan rangkap DNA antara nukleosom untuk membentuk fragmen 180-200 bp, yang muncul sebagai "tangga" pada elektroforesis gel agarosa DNA [2]. Dalam percobaan kami, melalui pengamatan di bawah mikroskop elektron dan deteksi elektroforesis gel agarosa, kelompok Sijunzi Tang tidak menunjukkan penanda karakteristik apoptosis yang jelas, dan elektroforesis agarosa tidak menunjukkan "tangga" DNA yang khas, sehingga kami tidak melihat perubahan apoptosis yang khas. Penelitian ini menunjukkan bahwa Sijunzi Tang menunjukkan tingkat penghambatan tumor yang jelas pada tikus hormonal, dan mekanismenya tidak terkait dengan induksi apoptosis sel tumor. Sijunzi Tang terutama bersifat tonik dan mungkin tidak memiliki efek menyerang kejahatan secara langsung. Dalam percobaan in vivo, kelompok Sijunzi Tang memiliki efek penekan tumor yang signifikan, yang mungkin bekerja melalui jalur lain secara keseluruhan. Literatur melaporkan bahwa obat tonik memiliki efek positif pada fungsi kekebalan tubuh dan waktu bertahan hidup hewan hormonal dalam percobaan in vivo [3]. Sijunzi Tang dapat secara signifikan meningkatkan aktivitas sel NK pada tikus hormonal, dan mekanisme anti-tumor dari obat tonik kelas Sijunzi Tang terutama dapat meningkatkan fungsi kekebalan tubuh, meningkatkan aktivitas sel NK dan sel LAK dalam tubuh, dan memberikan efek membunuh tidak langsung [3], yang dapat mencapai tujuan menghalau kejahatan dengan mendukung hal positif. Hasil percobaan menunjukkan bahwa Sijunzi Tang, yang termasuk dalam manfaat tonik, secara signifikan dapat menghambat pertumbuhan tumor pada tikus hormonal, yang membuktikan bahwa obat tradisional Tiongkok semacam ini memiliki efek penekan tumor yang jelas secara in vivo. Sijunzi Tang tidak menginduksi apoptosis sel tumor secara in vivo, dan efeknya pada tumor dapat dicapai melalui tindakan lain.