Pentingnya diagnosis molekuler leukemia
Tujuan diagnosis molekuler leukemia adalah untuk membantu dalam pengobatan klinis, pemilihan obat dan prognosis, untuk mengidentifikasi kelompok leukemia dengan patogenesis yang berbeda dan untuk mengeksplorasi penyebabnya. Faktor penentu utama dari jenis leukemia diadopsi pada tahun 1990-an. Metode pengetikan MIC masih belum sepenuhnya mencerminkan manajemen klinis leukemia dan hubungannya dengan prognosis. Sejumlah penelitian telah mengkonfirmasi bahwa gen fusi yang dihasilkan dari translokasi kromosom berkaitan erat dengan kerentanan leukemia. Kombinasi fitur morfologi, imunofenotipik, genetik dan klinis berusaha untuk mencerminkan sifat “sebenarnya” dari penyakit ini. Leukemia myeloid akut AML dibagi menjadi lima kelompok utama.
1. AML dengan translokasi kromosom.
2. AML dengan myelodysplasia.
3. AML yang terkait dengan pengobatan dan sindrom myelodysplastic
4. AML yang tidak dapat diklasifikasikan (FAB)
5. Leukemia bifenotipik
Menurut kriteria untuk FAB, signifikansi AML adalah jumlah sel primitif 30%. Penelitian terbaru menunjukkan bahwa pasien dengan jumlah sel primitif 20% hingga 30% memiliki prognosis yang serupa dengan pasien dengan jumlah sel primitif lebih dari 30%. Oleh karena itu disepakati bahwa jumlah primosit sebagai kriteria untuk mendiagnosis AML harus 20%, membuang anemia refrakter dengan primositosis yang berubah. Pekerjaan klinis baru-baru ini telah mengungkapkan bahwa sebagian besar leukemia memiliki semacam translokasi kromosom, dan bahwa translokasi dapat menghasilkan gen fusi baru yang mengkodekan protein fusi. Dengan menggunakan penanda ini, berbagai jenis leukemia dapat didiagnosis. Skema klasifikasi Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) 2000 untuk leukemia sudah mencakup translokasi kromosom sebagai salah satu indikator yang paling penting. Deteksi gen fusi yang dibentuk oleh translokasi kromosom relatif mudah dan sensitif dan telah digunakan secara langsung dalam diagnosis leukemia. Varian genetik pada leukemia sering disertai dengan kelainan morfologi yang khas dan gambaran klinis unik yang sangat erat kaitannya dengan manajemen klinis. Memahami ciri-ciri ini sangat penting untuk diagnosis dan pengobatan leukemia yang akurat.
Diagnosis genetik leukemia akut
Leukemia promyelositik akut t(15;17) membentuk PML/RARα dan variannya.
Leukemia promyelocytic akut (APL) adalah penyakit agresif yang mudah mengalami komplikasi DIC dan sering meninggal dalam waktu 1 minggu tanpa pengobatan; translokasi kromosom APL t(15;17) (q22;q21) menghasilkan fusi gen leukemia promyelocytic (PML) yang terletak di 15q22 dan dan dan gen retinoic acid receptor alpha (RARα) 17q21 untuk membentuk gen PML / RARα [3]. APL multi Translokasi ini terdeteksi baik pada fenotip granulositik maupun mikrogranulositik. Mereka yang memiliki t(15;17) dan PML/RARα hanya efektif untuk pengobatan asam retinoat dan arsenik trioksida. Empat translokasi varian langka t(11;17)(q13;q21), t(11;17)(q23;q21), t(5;17)(q32;q21) dan dup(17q) yang membentuk gen fusi NuMA/ RARα, PLZF/RARα, NPM/RARα dan STAT5b/RARα juga telah diidentifikasi dalam beberapa tahun terakhir [4,5]. APL dengan t(11;17), t(11;17) sering tidak efektif dengan terapi asam retinoat.
Gen fusi AML1-ETO dengan translokasi kromosom t(8;21) pada leukemia myeloid akut
Kromosom t(8;21) (q22;q22) menyebabkan gen fusi AML1-ETO adalah gen abnormal yang paling umum pada leukemia granulositik akut (AML).[6] Gen AML1 yang terletak pada kromosom 21q22 menyatu dengan gen ETO pada 8q22 untuk menghasilkan AML1-ETO. merupakan jenis leukemia akut dengan prognosis yang lebih baik dan mudah mencapai remisi. Sekitar 20-40% pasien AML-M2 memiliki t(8;21) dan kejadiannya meningkat seiring bertambahnya usia; pada AML, subtipe M2b memiliki gen fusi AML1-ETO pada 90%. m2b memiliki ciri morfologi yang khas seperti mieloperoksidase positif yang kuat, vesikula Auer yang menonjol, vakuolasi sitoplasma yang mudah dan butiran oranye-merah dalam sitoplasma neutrofil dewasa, yang dapat didiagnosis secara klinis. Hal ini dapat diperiksa silang dengan kelainan genetik.
Leukemia myeloid akut kromosom inv(16) gen fusi CBFB/MYH11
Gen fusi CBFB/MYH11 yang dibentuk oleh kromosom Inv(16)(p13q22) atau t(16;16)(p13q22) hanya terlihat pada AML-M4EO dan tidak pada jenis leukemia lainnya [7]. Secara sitologi leukemia jenis ini sering menunjukkan infiltrasi sel leukemia granulositik dan monositik dengan kelainan eosinofil sumsum tulang yang khas, termasuk peningkatan jumlah (>5%) atau kelainan kualitatif (butiran pewarnaan basofilik yang besar dan tidak teratur diselingi dengan butiran eosinofilik dan kepositifan yang kuat untuk glikogen dan kloroasetat lyase). Prognosis untuk jenis leukemia ini lebih baik.
Leukemia myeloid akut dengan kelainan kromosom 11q23 (MLL)
Jenis leukemia garis keturunan campuran (MLL) yang paling umum[8] dengan varian gen yang relevan secara morfologis adalah AML-M5 dan AML-M4. Baik AML dan ALL dapat memiliki varian gen MLL, dengan MLL/AF4 yang paling umum terjadi pada ALL masa kanak-kanak dan MLL/AF9 paling umum terjadi pada AML-M5. Yang dkk. menemukan[9] bahwa sel positif MLL/AF6 semuanya memiliki ciri khas Ciri-ciri leukemia monositik primitif (AML- M5a): inti terlipat, 1-2 nukleolus yang besar dan terdefinisi dengan baik, sitoplasma tembus cahaya, sitoplasma yang dipenuhi dengan butiran merah muda yang halus, vesikel Auer yang terlihat memanjang, dan area bernoda samar-samar yang berbeda di sebelah nukleus. Pewarnaan peroksidase negatif dan pewarnaan lipase non-spesifik positif (dapat dihambat oleh sodium fluorida). Penataan ulang MLL/AF6 mungkin merupakan penanda penting dari subtipe AML-M5a dan terkait erat dengan diferensiasi monosit.
Diperkirakan bahwa mereka yang memiliki kelainan morfologi dan diduga menderita leukemia akut dengan salah satu kelainan kromosom di atas harus didiagnosis menderita leukemia bahkan jika sumsum tulang memiliki <20% sel primitif. Mutasi pada gen NPM1 pada leukemia myeloid akut Baru-baru ini Gorello dkk. menemukan bahwa 25% AML mengalami mutasi pada gen NPM1 (nukleofosmin) [10], yang mengakibatkan adanya protein NPM dalam sitoplasma sel. Ini dapat digunakan sebagai penanda untuk AML tanpa translokasi kromosom. Leukemia limfoblastik akut (ALL) TEL-AML1 TEL-AML1 adalah gen fusi yang umum pada leukemia masa kanak-kanak, dibentuk oleh t(12;21) (p13;q22), dengan TEL pada kromosom 12 dan AML1 pada kromosom 21. Terlihat pada 12-28% B-lineage ALL, tetapi hanya pada B precursor cell ALL (BCP-ALL), bukan pada B-ALL dewasa atau T-ALL. TEL-AML1 adalah indikator prognosis yang lebih baik. Penataan ulang gen imunoglobulin dan reseptor sel-T pada leukemia limfoblastik akut Penggunaan gen reseptor sel-T (TCR) dan imunoglobulin (Ig) untuk mendeteksi leukemia limfositik didasarkan pada prinsip bahwa selama diferensiasi sel punca menjadi limfosit, daerah variabel (V) dan daerah pengikatan (J) gen TCR dan gen Ig disusun ulang, yaitu dua segmen yang jauh disusun ulang bersama untuk membentuk segmen baru. Setiap limfosit memiliki urutan sendiri dari fragmen TCR atau dan Ig yang berbeda. Sel leukemia ALL berproliferasi secara monoklonal dan leukemia dianggap jika hanya satu fragmen penataan ulang gen yang terdeteksi. Rantai berat Ig (H), gen TCRγ dan TCRδ sering digunakan sebagai penanda untuk mendeteksi leukemia limfositik.