Tumor kandung kemih memiliki karakteristik biologis yang mudah kambuh, dan pengobatan pasca operasi dengan obat yang ditanamkan ke dalam kandung kemih secara intravesikal dapat secara signifikan meningkatkan prognosis. Namun, masih ada banyak masalah dengan kemoterapi, di antaranya resistensi multidrug (MDR) adalah salah satu faktor penting kegagalan kemoterapi, sehingga MDR telah menjadi pusat perhatian dalam penelitian klinis dan penelitian dasar onkologi dalam beberapa tahun terakhir. Berbagai faktor dapat menyebabkan MDR, di antaranya mekanisme P-glikoprotein telah dipelajari paling banyak dan luas, dan ekspresi protein dipengaruhi oleh berbagai faktor, percobaan ini mengamati ekspresi gen resistensi multi-obat (MDR-1mRNA) pada tingkat gen dan pengaruhnya terhadap perilaku biologis klinis. 1, Data dan Metode 1.1 Subjek penelitian Semua spesimen diambil dari jaringan tumor kandung kemih yang dibedah dari pasien yang dirawat di rumah sakit di departemen sarjana ini antara Januari 1998 dan Desember 1998, yang ditemukan melalui sistoskopi sebelum operasi dan dikonfirmasi dengan pemeriksaan patologis. Jenis patologis: semua 30 kasus dalam kelompok ini adalah karsinoma sel kandung kemih yang bermigrasi, menurut klasifikasi jaringan patologis WHO: kasus G110, G213, G37. Terdapat 16 kasus tumor primer dan 14 kasus tumor rekuren setelah pemberian agen kemoterapi secara intravesikal. Kontrol normal adalah mukosa kandung kemih normal di luar 2 cm dari dasar tumor kandung kemih, yang direseksi secara intraoperatif dan diperiksa secara histologis seperti normal. 1.2 Pengumpulan dan penyimpanan spesimen jaringan Semua spesimen dikumpulkan saat tumor kandung kemih diangkat selama operasi, dan jaringan nekrotik di pusat tumor dihindari selama pengambilan sampel. Spesimen segar dalam waktu 2 jam setelah operasi digunakan untuk percobaan, atau spesimen dimasukkan ke dalam lemari es bersuhu sangat rendah pada suhu -70℃ segera setelah spesimen dikeluarkan untuk diawetkan untuk pemeriksaan. 1.3 Reagen utama: AMV reverse transcriptase dibeli dari Promega, dan TaqDNA polimerase dibeli dari Institut Genetika, Akademi Ilmu Pengetahuan Cina. 1.4 Instrumen utama Instrumen PCR Gene Cycler (B10-RAD, USA). 1.5 Deteksi tingkat ekspresi gen resistensi multi-obat (MDR1) RT-PCR kuantitatif digunakan. 1.5.1 Ekstraksi RNA total jaringan: ekstraksi RNA total dalam sampel dilakukan dengan metode satu langkah asam isotiosianat, dan RNA total yang diekstraksi dilarutkan dengan menambahkan 50-100 μL air deionisasi DEPC, dan kemudian sebagian sampel diambil untuk mengidentifikasi kualitasnya dengan deteksi elektroforesis gel formaldehida dan A260 dan A280 ditentukan dengan spektrofotometri UV, dan A260 / A280 dihitung, dan rasionya semuanya lebih besar dari 1.8, dan kandungan RNA-nya dihitung berdasarkan A260. Rasio A260/A280 lebih besar dari 1,8, dan kandungan RNA dihitung berdasarkan A260. 1.5.2 Sintesis cDNA dengan transkripsi balik Reaksi transkripsi balik dilakukan dalam sistem reaksi 50 μL yang mengandung 5 μL RNA total, 0,5 μg inhibitor RNAase (Rnasin 40 U, AMV 10 U, dNTP 40 μL) dan 0,5 μg inhibitor RNAase (Rnasin 40 U, AMV 10 U, dNTP) 40 μL). RT diselesaikan dalam penangas air 42 ℃ selama 1 jam. Enzim dinonaktifkan dalam penangas air 95 ℃ selama 5 menit dan segera ditempatkan di penangas es, dan 50 μL DEPC ditambahkan untuk menyiapkan templat untuk cDNA yang digunakan untuk PCR. 1.5.3 Reaksi amplifikasi PCR: Reaksi amplifikasi PCR dilakukan dengan menggunakan dua pasang primer oligonukleotida, salah satunya adalah primer MDR-1mRNAcDNA, urutan primer: keadilan MDR-1mRNA: 5′-CCCATCATTGCAATAGCAGG-3′; antisense: 5′-GTTCAAACTTCTGCTCCTCA-3′. Primer kontrol internal β2-mikroglobulin dirancang dengan mengacu pada literatur, 5′-ACCCCCCACTGAAAAAGATGA3′-ATCTTCAAACCTCCATGATG. 1.5.4 Penilaian hasil PCR: setelah produk PCR dipisahkan dengan elektroforesis, sampel positif harus memiliki tiga pita dengan ukuran berat molekul 300 bp dan 170 bp, di mana 300 bp adalah standar internal b2-MG, sedangkan produk 170 bp adalah gen mRNA MDR-1. Rasio intensitas kedua pita (MDR-1mRNA/b2MG) adalah nilai relatif ekspresi gen MDR-1mRNA, yang dengannya dapat dinilai perbedaan tingkat ekspresi MDR-1mRNA pada setiap sampel. 2. Hasil Kondisi RT-PCR di atas diterapkan pada 30 spesimen tumor kandung kemih dan 26 jaringan mukosa kandung kemih normal, dan ekspresi MDR-1mRNA pada 26 spesimen mukosa kandung kemih normal adalah 15,4%. 17/30 (56,7%) dari 30 tumor kandung kemih positif MDR-1mRNA, dan tingkat kepositifan tumor G1, G2 dan G3 masing-masing 40%, 61,5%, 61,5%, 61,5%, dan 61,5%. Tingkat positif tumor G1, G2 dan G3 masing-masing adalah 40%, 61,5% dan 71,4%. 16 spesimen tumor primer memiliki tingkat positif 37,5%, dan 14 spesimen tumor rekuren setelah kemoterapi memiliki tingkat positif 78,6%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa jaringan mukosa kandung kemih normal memiliki ekspresi MDR-1mRNA, dan ekspresi MDR-1mRNA terkait dengan tingkat diferensiasi tumor. Terdapat peningkatan yang signifikan dari ekspresi MDR-1mRNA pada tumor rekuren setelah kemoterapi. 3, DISKUSI Resistensi sel tumor kandung kemih terhadap agen kemoterapi merupakan hambatan utama untuk kemoterapi pasca operasi untuk tumor kandung kemih. Alasan utama mengapa banyak tumor di klinik akhirnya kambuh lagi setelah kemoterapi yang awalnya efektif adalah resistensi sel tumor terhadap obat kemoterapi. Obat kemoterapi yang umum digunakan terkait dengan gen MDR1 termasuk agen pengalkilasi (misalnya BCNU, ME-CCNU, dll.), basa tanaman (misalnya Vincristine, Vincristine, VM26, dll.), Antibiotik (misalnya mitomisin, Adriamisin, Bleomisin, dll.), Hormon (misalnya deksametason, dll.). Obat-obatan ini biasanya berupa senyawa lipofilik dengan berat molekul besar dan umumnya digunakan dalam terapi tumor kandung kemih. Ketika sel tumor resisten terhadap salah satu obat ini, mereka dapat menjadi toleran silang terhadap jenis obat lain pada saat yang sama, oleh karena itu, ekspresi gen MDR1 pada tumor kandung kemih berkaitan erat dengan resistensi terhadap obat kemoterapi.