Untuk menyelidiki efek butiran Gongqing pada apoptosis sel dan transduksi sinyal pada vili korionik awal kehamilan manusia dan jaringan mabung, dan untuk memberikan dasar biologis untuk pencegahan klinis dan pengobatan perdarahan uterus abnormal setelah aborsi medis (disebut sebagai perdarahan pasca aborsi medis). ekspresi protein. Hasil: Ultrastruktur vili korionik dan sel metamorfosis pada kelompok aborsi Miyagi menunjukkan perubahan apoptosis yang khas, dengan peningkatan AR, [Ca2 +] i, dan penurunan ekspresi protein PKC, yang secara statistik signifikan dibandingkan dengan tiga kelompok lainnya (P <0,05 atau P <0,01). Kesimpulan: Butiran Gongqing dapat mempengaruhi Ca2+ intraseluler dan transduksi sinyal sel yang dimediasi PKC, menginduksi apoptosis vili korionik awal kehamilan manusia dan jaringan mabung, dan mendorong keluarnya vili korionik dan jaringan mabung secara menyeluruh, sehingga mencegah dan mengendalikan perdarahan setelah aborsi obat. Aborsi obat memiliki keuntungan keamanan dan rasa sakit yang lebih sedikit, tetapi ada masalah seperti waktu perdarahan yang lama, perdarahan hebat, dll. Dalam beberapa kasus, waktu perdarahan selama 1-4 bulan, dan ada 6% -10% tingkat aborsi yang tidak lengkap dan potensi risiko perdarahan. Formula obat Cina Gongqing Granules adalah formula efektif yang telah digunakan dalam praktik klinis untuk waktu yang lama, dan telah disetujui oleh Badan Pengawas Obat Negara untuk penelitian klinis obat baru, dan telah berhasil menyelesaikan studi klinis fase II. Dalam penelitian ini, kami menyelidiki mekanisme butiran Gongqing dalam mencegah dan mengendalikan perdarahan pasca-aborsi obat dari perspektif apoptosis dan transduksi sinyal, sehingga dapat memberikan dasar biologis untuk aplikasi klinis dan memperkaya konotasi ilmiah dari teori "banyak kekurangan dan stagnasi pada periode postpartum" dalam pengobatan Tiongkok. Data dan Metode I. Subjek 120 kasus, yang semuanya terlihat di klinik rawat jalan ginekologi Rumah Sakit Afiliasi Universitas Pengobatan Tradisional Tiongkok Shandong dari Mei 2006 hingga Oktober 2007, dimasukkan dan dikeluarkan sesuai dengan isi Obstetri dan Ginekologi Tiongkok, Rutinitas Diagnostik dan Pengobatan Obstetri dan Ginekologi, dan Pedoman Penelitian Klinis Pengobatan Tradisional Tiongkok Baru. Menurut tabel nomor acak, subjek dibagi menjadi kelompok aborsi obat Gongqing (Kelompok A), kelompok aborsi obat Xi Zhi (Kelompok B), kelompok aborsi obat sederhana (Kelompok C) dan kelompok aborsi penyedotan tekanan negatif (Kelompok D) dengan metode pengelompokan acak tersamar ganda, masing-masing kelompok terdiri dari 30 kasus. Obat-obatan dan reagen: Mifepristone (China National Drug Administration (CNDA) H20000628, no. batch 050501) dan Misoprostol (CNDA H10960144, no. batch 050309) diproduksi oleh Shanghai Hualian Pharmaceutical Co. Ltd (Persetujuan Penelitian Klinis Administrasi Obat Negara untuk Obat Baru 2003L01386). Kelompok A menggunakan mifepristone dan misoprostol sesuai dengan metode rutin aborsi obat. 2. Kelompok B: Mifepristone dan misoprostol diberikan pada hari pertama aborsi, 48g/d dalam 3 dosis selama 3 hari. Kelompok B: Mifepristone dan misoprostol diberikan pada hari pertama aborsi, 15 kapsul/d dalam 3 dosis selama 3 hari. 3. Kelompok C: Mifepristone dan misoprostol diberikan dengan cara aborsi obat yang biasa dilakukan, dan tidak ada obat tradisional Tiongkok yang diberikan. 4. Kelompok D: Aborsi hisap tekanan negatif. Analisis histologis 1, pengumpulan bahan masing-masing 30 kasus vili korionik segar dan 20 kasus jaringan mekonium yang dikeluarkan setelah minum obat pada kelompok A, B dan C, dan masing-masing 30 kasus vili korionik dan jaringan mekonium yang diperoleh selama pembedahan pada kelompok D. Bahan-bahan tersebut dibilas dengan larutan garam fisiologis dengan segera, dan difiksasi secara konvensional. 2, Pengamatan mikroskop elektron transmisi dari ultrastruktur sel Penyematan resin epoksi (812), mesin penyayat ultra-tipis, ketebalan sekitar 60 nm, pewarnaan ganda dioksiranyl asetat dan timbal sitrat, pengamatan mikroskop elektron transmisi JEM-1200EX, dan foto. 3, metode TUNEL untuk mendeteksi AR seluler Setelah bagian spesimen diwarnai dengan HE, dikeringkan, diinkubasi dengan proteinase K pada suhu kamar selama 20 menit; 50 μl campuran reaksi TUNEL ditambahkan setetes demi setetes dan diinkubasi dalam kotak basah pada suhu 37 ℃ selama 60 menit; 50 μl agen pengubah POD ditambahkan dan diinkubasi pada suhu 37 ℃ selama 30 menit; bagian tersebut didehidrasi, diklarifikasi dan ditutup dengan DAB, pewarnaan ulang nuklir hematoksilin. Semua langkah di atas dibilas dengan PBS, dan kontrol negatif diinkubasi dengan larutan reaksi TUNEL tanpa deoksinukleotidil transferase. Analisis gambar kuantitatif: Reaktan positif TUNEL terlokalisasi di dalam nukleus dan tampak berwarna kuning kecoklatan, dan sel yang berwarna positif adalah sel yang mengalami apoptosis [6]. Sepuluh bidang pandang yang tidak tumpang tindih (× 100) dipilih secara acak, dan persentase sel positif adalah AR. 4. Deteksi [Ca2+] dengan spektrofotometer fluoresensi Kisi eksitasi diatur pada 5 nm, kisi emisi pada 10 nm, dan suhu pengukuran adalah 37 ° C dalam Spektrofotometer Fluoresensi Hitachi F-4500. Spektrum eksitasi larutan standar Fura-2/AM dan larutan pemuatan diukur secara spektroskopi, dan panjang gelombang maksimumnya menurun dari 380 nm ke 340 nm, yang mengindikasikan bahwa pemuatan Fura-2/AM masuk ke dalam sel. Intensitas fluoresensi (nilai-F) larutan pemuatan Fu-ra-2 ditentukan secara temporal (panjang gelombang eksitasi 340 nm) dengan menambahkan 10% TritonX-100 pada konsentrasi akhir 0,1%, dan intensitas fluoresensi maksimum Fmax terdeteksi setelah 30 menit, dan intensitas fluoresensi minimum Fmin diukur setelah 30 menit dengan menambahkan EDTA pada konsentrasi akhir 5 mmol /, l. [Ca2+] i( nmol / L) = Kd (F-Fmin / Fmas-F), Kd adalah konstanta disosiasi untuk reaksi antara Fura-2 dan Ca2 +, 224nmol / L pada 37 ℃. 5, Imunohistokimia untuk mendeteksi perubahan ekspresi protein PKC seluler Bagian spesimen dikeringkan, diinkubasi dengan 3% H O pada suhu kamar selama 10 menit, dibilas dan diperbaiki dengan antigen oven microwave; 10% serum kambing normal ditutup dan ditambahkan dengan antibodi primer. Setelah dibilas, irisan diinkubasi dengan antibodi sekunder berlabel enzim lobak selama 30 menit pada suhu 37 ℃; setelah pengembangan warna dengan kromogen DAB, irisan dibilas dengan air ledeng, diistirahatkan dan ditutup. Hasilnya dianalisis oleh Leica QW dalam perangkat lunak analisis gambar V3, dan terdapat korelasi negatif antara kekuatan ekspresi protein dan ukuran skala abu-abu, yaitu, semakin kuat ekspresi protein, semakin rendah skala abu-abu. V. Metode statistik Perangkat lunak statistik SPSS12.0 digunakan, dan hasil data pengukuran dinyatakan sebagai rata-rata ± standar deviasi (± s), dan uji varians chi-square digunakan terlebih dahulu, dan kemudian uji-q dan uji peringkat-jumlah digunakan untuk perbandingan perbedaan antara kelompok, dan uji x2 digunakan untuk data hitungan. Hasil I. Kondisi umum Setelah analisis statistik, perbedaan antara keempat kelompok dalam hal usia, kesuburan, hari menopause, dan ukuran kantung kehamilan tidak signifikan secara statistik dan sebanding. Pengamatan ultrastruktural vili korionik dan sel metafase (Gambar 1) Kelompok D. Permukaan trofoblas korionik dan sel metafase kaya akan mikrovili, membran basal trofoblas normal, inti trofoblas dan sel metafase normal dalam morfologi, kromatin dalam nukleus terdistribusi secara seragam, organel normal, dan terdapat sejumlah besar butiran sekretori dengan kepadatan elektron yang tinggi pada sel granulosa, serta hubungan antar sel yang erat. Kelompok C. Mikrovili permukaan trofoblas dan sel metafase terlepas, membran basal trofoblas menebal, inti trofoblas dan sel metafase tidak beraturan, membran nukleus membengkak, dan terjadi perubahan morfologi apoptosis, seperti penggumpalan euchromatin, pengumpulan heterokromatin, dan kondensasi nukleus. Sel granulosa menunjukkan penurunan yang nyata pada butiran endokrin dan pelebaran persimpangan antar sel. Kelompok B. Perubahan ultrastruktural dari syncytiotrophoblast, cytotrophoblast, sel metafase dan sel granulosa mirip dengan yang ada di Kelompok C. Kelompok B menunjukkan perubahan morfologi apoptosis. Kelompok A menunjukkan perubahan morfologi apoptosis yang lebih serius dibandingkan dengan kelompok C dan B. Vesikel apoptosis yang khas, yang mengandung organel dengan struktur normal, muncul pada sinsitiotrofoblas, sitotrofoblas, sel metafase, dan sel granulosa. Perubahan AR, [Ca2+] i dan PKC pada kelompok A, AR dan [Ca2+] i trofoblas korionik dan sel metafase meningkat, dan nilai abu-abu PKC sel korionik dan metafase meningkat, dan perbedaannya signifikan secara statistik dibandingkan dengan tiga kelompok lainnya (P<0,05), yang menunjukkan bahwa ekspresi protein PKC pada kelompok A berkurang dibandingkan dengan kelompok lainnya. Tabel 1 Perubahan AR, [Ca2+]i dan PKC dalam sel trofoblas kromaffin (±s) Kelompok Jumlah kasus AR (%) [Ca2+]i Nilai abu-abu PKC Kelompok A 30 3.02±0.20* ▲ ▲ △ 125.37±6.40* ▲ △ △ 135.71±3.82* ▲ △ Kelompok B 30 2.89±0.19* 120.33±7.58* 133.73± 3.81* Kelompok C 30 2.89±0.19* 120.33±7.58* 133.73± 3.81* Kelompok B 30 2.89±0.19* 120.33±7.58* 133.73± 3.82 3.81* Kelompok C 30 2.87±0.21* 119.91±6.80* 133.17±3.70* Kelompok D 30 2.17±0.23 109.03±7.84 127.51±3.73 *P<0.01 dibandingkan dengan Kelompok D ▲P<0.05 dibandingkan dengan Kelompok C ΔΔΔ dibandingkan dengan Kelompok B ΔΔΔ dibandingkan dengan Kelompok C ΔΔΔ dibandingkan dengan Kelompok B Kelompok B P<0.01 Tabel 2 Perubahan AR, [Ca2+] i dan PKC sel jaringan desidua (±s) Kelompok Jumlah kasus AR (%) [Ca2+] i Nilai skala abu-abu PKC Kelompok A 20 3.13 ± 0.18 * ▲ △ 130.65 ± 7.46 * ▲ △ 142.80 ± 4.93 * ▲ △ Kelompok B 20 3.02 ± 0.14 * 125.14 ± 8.04 * 139.17±4.94* Kelompok C 20 2.99±0.19* 124.42±7.96* 138.25±5.18* Kelompok D 30 2.83±0.15 110.31±7.53 131.45±4.03 *P<0.01 vs Kelompok D ▲ P<0.05 vs Kelompok C △ P<0.05 vs Kelompok B PEMBAHASAN Penelitian terbaru menyimpulkan bahwa Perdarahan uterus abnormal setelah aborsi obat terkait dengan apoptosis yang tidak mencukupi dari vili korionik dan sel mabung, dan sel-sel vili korionik dan jaringan mabung setelah aksi mifepristone menunjukkan kecenderungan apoptosis, dan hasil penelitian ini konsisten dengan laporan tersebut. Telah terbukti bahwa pengobatan tradisional Tiongkok dapat mengatur apoptosis, mengaktifkan sirkulasi darah dan menghilangkan stasis darah dapat menginduksi apoptosis dan mengatur keseimbangan antara proliferasi sel dan apoptosis, dan membersihkan panas dan obat tonik dapat menginduksi apoptosis sel tumor, tetapi belum ada laporan penelitian tentang pengobatan tradisional Tiongkok yang menginduksi apoptosis vilus korionik awal kehamilan manusia dan ekdisis untuk mencegah perdarahan pasca-aborsi obat. Dalam penelitian ini, kami mengamati perubahan ultrastruktural vili korionik dan sel jaringan mabung pada empat kelompok wanita setelah aborsi, dan menemukan bahwa tingkat apoptosis vili korionik dan sel jaringan mabung pada butiran Gongqing yang digunakan dalam aborsi obat lebih tinggi dibandingkan dengan tiga kelompok lainnya, dan AR vili korionik dan mabung pada kelompok ini secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok lain, menunjukkan bahwa butiran Gongqing memiliki efek menginduksi apoptosis vili korionik dan sel mabung pada aborsi obat pada kehamilan awal manusia. Untuk mengeksplorasi lebih lanjut mekanisme kerja butiran Gongqing ini, kami telah mempelajari pembawa pesan kedua Ca2 + dan protein molekul target penting PKC, yang merupakan kunci aktivitas kehidupan sel. Ca2+ adalah pusat dari berbagai jalur pensinyalan sel, dan ada bukti bahwa peningkatan [Ca2+] i dapat menyebabkan apoptosis. Dalam beberapa tahun terakhir, penelitian tentang apoptosis pada aborsi yang diinduksi oleh obat telah dilakukan secara mendalam, tetapi penelitian tentang kelebihan Ca2+ , faktor penting yang terlibat dalam transduksi sinyal apoptosis, belum dilaporkan. Untuk pertama kalinya, kami memasukkan [Ca2 +] i dalam studi efek obat aborsi pada apoptosis, dan menemukan bahwa [Ca2 +] i vili korionik dan mekonium meningkat oleh butiran Gongqing, menunjukkan bahwa butiran Gongqing dapat menginduksi apoptosis pada vili korionik dan mekonium kehamilan awal manusia dengan mempengaruhi transduksi sinyal yang dimediasi oleh Ca2 +. Dalam jalur pensinyalan, PKC adalah protein target penting untuk aksi Ca2+ intraseluler, dan memainkan peran penting dalam pertumbuhan, diferensiasi, dan apoptosis sel. Aktivasi PKC memediasi berbagai efek biologis dengan memfosforilasi residu serin / treonin dari molekul protein target, yang dapat menurunkan aktivasi protein G karena fosforilasi, menyebabkan peningkatan kadar siklik adenosin monofosfat (cAMP) dan menginduksi apoptosis. Juga telah dilaporkan bahwa aktivasi PKC menginduksi peningkatan kadar cAMP intraseluler, yang mendorong transkripsi yang mengarah pada proliferasi dan diferensiasi sel. Ditemukan bahwa mifepristone menghambat jalur transduksi sinyal PKC dan rantai kinase air terjun raf-1 dan protein pengaktif pembelahan pada sel trofoblas awal kehamilan, menghambat proliferasi dan pembelahan, dan menginduksi apoptosis. Dalam penelitian ini, kami menemukan bahwa ekspresi protein PKC dalam sel trofoblas korionik dan sel jaringan metafase berkurang setelah aborsi obat, menunjukkan bahwa pelet Gongqing dapat menghambat diferensiasi sel dan nilai tambah serta menginduksi apoptosis dengan mengurangi ekspresi protein PKC. Pengobatan Tiongkok percaya bahwa aborsi obat adalah penghentian kehamilan secara artifisial, aborsi obat yin dan darah tiba-tiba lemah, gas tidak mengambil darah; atau aborsi tidak lengkap, sisa darah stagnasi rahim, stasis darah tidak pergi, sulit bagi darah baru untuk aman; atau kejahatan eksternal yang diserang oleh pembuatan bir panas, luka panas pada darah; atau ketiganya saling terkait satu sama lain, hidup berdampingan dengan yang nyata dan yang virtual, menghasilkan pelepasan yang tidak bersih. "Stasis darah, defisiensi dan panas adalah mekanisme utama penyakit ini, mengaktifkan sirkulasi darah untuk menghilangkan stasis darah adalah kunci untuk mengobati penyakit ini, dan sirkulasi darah akan dilakukan ketika stasis darah dihilangkan, dan menyehatkan darah serta memberi manfaat pada qi adalah dasar untuk mengobati penyakit ini. Materia Medica, the principal medicine of Gongqing Granules, activates blood circulation and removes blood stasis, clears heat and stops bleeding; the ministerial medicines, Amaranthus, Radix et Rhizoma Gastrodiae, Radix Achyranthis Bidentatae, Radix Achyranthis Bidentatae, help the principal medicine to activate blood circulation and remove blood stasis, cools blood circulation and stops bleeding; the adjuvants, Radix Angelicae Sinensis, Radix Codonopsis Pilosulae, nourish blood and benefit the vitality of qi and activate blood circulation and remove blood stasis; and the medicine, Glycyrrhiza Glutinosa, tonifies and benefits qi and regulates the medicines; experiments have confirmed that this medicine can synergize with Mifepristone in anti-early pregnancy and increase the rate of complete miscarriage, shorten the time of vaginal bleeding, reduce vaginal bleeding, and does not influence the function of ovarian ovulation or the restoration of menses. Percobaan farmakodinamik menunjukkan bahwa Butiran Gongqing dapat secara signifikan merangsang otot polos uterus, mempersingkat waktu koagulasi, meningkatkan kandungan estrogen, memiliki efek antibakteri dan analgesik, dan menemukan bahwa obat tersebut memiliki kecenderungan untuk menginduksi apoptosis sel korionik. Ditemukan bahwa formula ini dapat menginduksi apoptosis vili korionik awal kehamilan manusia dan sel jaringan mabung, mendorong pelepasan lengkap vili korionik dan jaringan mabung, sehingga mencegah dan mengendalikan perdarahan setelah aborsi medis. Regulasi Ca2+ dan pensinyalan seluler yang dimediasi PKC mungkin merupakan salah satu mekanisme kerjanya. Namun, sumber Ca2+ intraseluler dan mekanisme yang tepat dalam menginduksi apoptosis vili korionik dan jaringan ekimotik belum diklarifikasi, dan penelitian mendalam ke arah ini akan lebih lanjut mengungkapkan patogenesis penyakit ini dan mekanisme pencegahan dan pengobatan obat.