Fistula anal yang khas pada awalnya dapat dinilai dari penampilannya, karena sering kali terdapat satu atau lebih kerusakan pada permukaan kulit di sekitar anus dan bokong pasien, yang tampak sebagai cekungan atau tonjolan dengan nanah yang mengalir keluar, dll. Namun demikian, untuk membuat diagnosis yang akurat, diperlukan kombinasi palpasi jari, probing, pewarnaan, ultrasonografi, dan bahkan magnet nuklir untuk mengurangi kesalahan diagnosis atau diagnosis yang terlewatkan. Palpasi lokal: Palpasi meliputi palpasi ekstra-anal dan palpasi intra-anal. Untuk fistula superfisial, palpasi sering kali dapat mengungkapkan arah fistula, apakah lurus atau melengkung, dan jika terdapat lebih dari dua bukaan eksternal, apakah terdapat beberapa fistula sederhana (masing-masing dengan bukaan internal) atau fistula kompleks (banyak bukaan eksternal dan hanya satu bukaan internal). Palpasi endoanal dilakukan untuk menentukan lokasi lubang internal dan untuk memahami tingkat sklerosis cincin anorektal. Umumnya, lubang internal fistula anorektal akan cekung, terangkat, terindurasi, dan keras, yang berbeda dari area lainnya. Dalam kasus fistula submukosa, palpasi memungkinkan panjang fistula, jalurnya, dan adanya stenosis usus. Untuk fistula yang dalam, kadang-kadang sulit untuk meraba jalurnya, terutama untuk fistula intersfingterik rektus supra-pubik, palpasi jari lebih sulit dan sering membutuhkan kombinasi tes lain untuk membuat diagnosis. Pemeriksaan dan pewarnaan: Kedua metode ini umumnya lebih sering digunakan secara intraoperatif. Jika fistula sederhana dan lurus, mudah untuk mendeteksi dari port eksternal ke internal, tetapi jika fistula melengkung atau bahkan jika fistula kompleks atau bercabang, sulit untuk menggunakan probe untuk keuntungannya. Suntikkan larutan biru metilen atau campuran biru metilen dan hidrogen peroksida dari mulut luar untuk mengamati area bernoda dari mulut bagian dalam, selain menodai jalur yang dilalui noda untuk memperjelas jalur fistula. Metode kontras: 30% hingga 40% minyak beryodium atau 60% pantethine dapat digunakan. Agen kontras disuntikkan dari port eksternal dan fistula diamati di bawah sinar-X dan lokasi port internal. Namun, kerugiannya adalah bahwa meskipun fistula terlihat jelas, hubungan otot perianal tidak dapat divisualisasikan, sehingga tidak cukup komprehensif dan hanya penilaian umum fistula yang dapat dibuat. Ultrasonografi intraluminal dan ultrasonografi endoskopi: Ultrasonografi intraluminal dapat dengan jelas membedakan arah fistula utama, distribusi dan jumlah cabang serta lokasi lubang internal. Ultrasonografi endoskopik adalah teknik komprehensif yang menggabungkan endoskopi dan ultrasonografi. Probe ultrasonografi miniatur dipasang ke ujung endoskop, yang dapat menampilkan gambar yang jelas dari semua tingkat dinding kanal dan struktur di sekitarnya. Magnetic Resonance Imaging (MRI): MRI memiliki resolusi jaringan lunak yang tinggi dan dapat secara langsung mencitrakan dalam tiga dimensi (frontal, sagital, dan aksial), yang dapat dengan jelas menunjukkan jalannya fistula dan hubungan dengan sfingter, dan dapat secara akurat menggambarkan struktur anatomi sfingter anal internal dan eksternal, levator anal, dan otot puborektal, terutama gambar otot yang lebih jelas setelah menekan lemak. Kesimpulannya, secara klinis, satu atau beberapa metode pemeriksaan harus dipilih sesuai dengan kompleksitas fistula anal untuk membuat penilaian yang akurat tentang jalannya fistula, lokasi lubang internal dan hubungan dengan otot sfingter untuk menghilangkan lesi secara akurat dan mengurangi kekambuhan.