IVF generasi kedua, atau IVF generasi kedua, biasanya memilih sperma yang relatif berkualitas tinggi dari sekumpulan sperma di bawah mikroskop melalui metode seperti sentrifugasi gradien dan menyelesaikan pembuahan melalui suntikan sperma tunggal, tetapi tidak memungkinkan untuk memilih sperma yang terbaik. IVF generasi kedua dapat secara efektif mengurangi kekurangan dalam proses pembuahan sperma, menyaring sebagian besar sperma yang relatif buruk, dan memilih sperma berkualitas tinggi dengan motilitas yang baik dan morfologi yang baik, sehingga meningkatkan tingkat keberhasilan pembuahan. Selain itu, meskipun IVF II dapat memilih sperma yang relatif berkualitas tinggi untuk pembuahan, namun sulit untuk menyelesaikan penyaringan jika kualitas sperma pasien sendiri terlalu buruk. Bagi pasien yang membutuhkan IVF dan kualitas spermanya terlalu buruk, mereka dapat mengikuti instruksi dokter untuk meningkatkan kualitas spermanya dengan memperhatikan istirahat, tidak merokok dan minum alkohol, serta berolahraga dengan benar sebelum menjalani IVF generasi kedua. Untuk pasien dengan azoospermia obstruktif, tusukan testis atau epididimis dapat digunakan untuk mendapatkan sperma dan melakukan pembuahan.