Secara umum, olahraga menyebabkan peningkatan sementara glukosa darah, jadi dianjurkan untuk beristirahat selama setengah jam sebelum mengukur glukosa darah. Setelah berolahraga, sekresi hormon kortisol, hormon adrenal, hormon noradrenal, dopamin, dan hormon lainnya dalam tubuh meningkat. Hormon-hormon di atas memiliki efek antagonis terhadap insulin dan melemahkan efek hipoglikemik insulin, yang dapat meningkatkan kadar glukosa darah tubuh. Jika nilai glukosa darah diukur segera setelah berolahraga, nilai yang terukur lebih tinggi dari normal, yang tidak kondusif untuk diagnosis penyakit. Umumnya dianjurkan untuk beristirahat selama setengah jam dan menunggu hormon dalam tubuh untuk memetabolisme sebelum mengukur. Namun demikian, sebagian pasien mungkin mengalami hipoglikemia setelah berolahraga, dan dalam hal ini, nilai glukosa darah perlu segera diuji dan pasien harus diinstruksikan untuk minum obat. Selain itu, olahraga umum yang sudah dilakukan sebelum mengukur glukosa darah, seperti berjalan kaki dan naik ke atas, akan memiliki efek yang lebih kecil pada hasilnya dan pasien tidak perlu khawatir tentang hal itu, tetapi mereka harus menghindari olahraga yang lebih intens.