Glukosa darah puasa adalah darah yang diambil setelah berpuasa semalaman dan sebelum sarapan. Biasanya, untuk mengambil glukosa darah puasa, Anda harus berpuasa selama lebih dari 8 jam, dan makanan ringan serta buah-buahan tidak boleh dikonsumsi lagi. Jika darah diambil pada jam 8:00 pagi keesokan harinya, tidak ada makanan yang boleh dikonsumsi lagi setelah jam 12:00 malam sebelumnya. Jika pasien khawatir dengan efeknya terhadap hasil, mereka dapat memperpanjang waktu puasa sedikit lebih lama, seperti 10 jam puasa. Sebenarnya, tidak ada banyak batasan untuk minum air putih, dan Anda dapat minum sedikit air dingin atau air hangat, selama Anda tidak menambahkan gula ke dalam air. Pola makan hari sebelumnya harus dijaga agar tetap normal, dengan jumlah karbohidrat tertentu, sekitar 100g. Jika sengaja dikurangi, maka akan berpengaruh pada pengukuran nilai glukosa darah. Selain itu, diet hari sebelumnya harus ringan, hampir sama seperti biasanya, tanpa ikan, daging, dan alkohol dalam jumlah besar, agar tidak berpengaruh pada glukosa darah hari berikutnya. Pasien juga harus menahan diri dari olahraga berat dan fluktuasi emosi sehari sebelum pengambilan glukosa darah puasa, karena fluktuasi emosi dan olahraga berat dapat menyebabkan sekresi glukagon yang berlebihan. Karena banyak pasien dengan masalah gula darah juga memiliki masalah dengan insulin, maka pemeriksaan insulin dapat dilakukan bersamaan dengan pemeriksaan gula darah.