215007 Institut Penyakit Hati, Rumah Sakit Rakyat Kelima Suzhou, Suzhou, Cina (Tong Fuyi Wu Jianhong Cao Wengui Wu Xingfu Fei Xiaofeng Ding Longqi)
[Abstrak] Tujuan: Untuk menyelidiki hubungan antara penanda virus hepatitis B (HBV-M) dan beban HBV (HBV-DNA), dan untuk memberikan dasar ilmiah untuk diagnosis klinis dan pengobatan yang tepat. METODE: HBV-M dan HBV-DNA dideteksi dalam serum 670 pasien dengan teknik reaksi berantai polimerase kuantitatif imunoluminesensi dan fluoresensi, masing-masing. hasil: HBV-DNA mode HBeAg-positif > 5,0e4 cps/ml menyumbang 96,3% (363/377), HBV-DNA mode HBeAg-negatif > 5,0e4 cps/ml menyumbang HBV-DNA load secara signifikan lebih tinggi dalam pola HBeAg-positif daripada pola HBeAg-negatif (P <0,05). Beban HBV-DNA secara signifikan lebih tinggi pada pola 1,3,5 daripada pola 1,4,5 (P <0,01). 18,8% (12/64), dan di antara pola anti-HBs positif, HBV-DNA >5,0e4 cps/ml menyumbang 16,7% (7/42). Kesimpulan: Beban HBV-DNA secara signifikan lebih tinggi pada pola HBeAg-positif daripada pola HBeAg-negatif. Namun, beberapa pola HBeAg-positif memiliki tingkat virus yang sangat rendah dan pola HBeAg-negatif memiliki tingkat virus yang tinggi. Ada juga infeksi HBsAg-negatif atau/dan anti-HBs-positif HBV. Oleh karena itu, hanya kombinasi pengujian HBV-M dan HBV load yang dapat menentukan penyakit dan prognosis dengan benar dalam praktik klinis. Tong Fuyi, Departemen Hepatologi, Rumah Sakit Rakyat Kelima Suzhou, Suzhou, Tiongkok
[Kata kunci] Virus hepatitis B; reaksi berantai polimerase; kuantifikasi fluoresensi; enzim immuno
Hubungan antara model penanda serologis dan jumlah virus pada pasien yang terinfeksi virus hepatitis B
Tong Fuyi, Shaowei, Cao Wengui, dkk. Departemen Penyakit Menular, Rumah Sakit Rakyat Kelima Suzhou, Suzhou 215007
[Abstrak] Tujuan Untuk memahami hubungan antara model penanda serologis dan jumlah virus hepatitis B (HBV). Metode Penanda serologis HBV pada 670 pasien dideteksi dengan menggunakan enzim immunoassay dan jumlah HBV pada mereka diukur dengan menggunakan Hasil Pasien HBeAg-positif yang salinannya lebih dari 5,0e4 /ml menyumbang 96,3%, dan salinan HBV pasien HBeAg-positif secara signifikan lebih banyak daripada pasien HBeAg-negatif yang salinannya lebih dari 5,0e4 /ml menyumbang 74,8%. Salinan HBV pasien HBeAg-positif secara signifikan lebih banyak daripada pasien HBeAg-negatif (P <0,05). Salinan HBV dari pasien anti-HBe-positif secara signifikan lebih sedikit daripada pasien anti-HBe-negatif (P <0,01). HBV-DNA terdeteksi pada beberapa pasien HBsAg-negatif (anti-HBs-positif atau tidak). Kesimpulan Salinan HBV dari pasien HBeAg-positif secara signifikan lebih banyak daripada HBeAg-negatif Namun, beberapa salinan HBV pasien HBeAg-positif sangat rendah, dan beberapa salinan HBV pasien HBeAg-negatif adalah HBV-DNA bahkan dapat dideteksi pada beberapa pasien HBsAg-negatif (anti-HBs-positif atau tidak). Sangat membantu untuk menilai prognosis yang akurat dengan menguji penanda serologis dan jumlah virus. Sangat membantu untuk menilai prognosis yang akurat dengan menguji penanda serologis dan jumlah virus. PCR kuantitatif (Q-PCR) telah menjadi kenyataan karena lompatan ke depan dalam teknologi polymerase chain reaction (PCR) dalam beberapa tahun terakhir. Kami menggunakan metode fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR) untuk mendeteksi HBV-DNA pada 670 kasus pasien yang terinfeksi HBV untuk mengeksplorasi hubungan antara HBV-M dan beban HBV. 1 Data dan metode 1.1 Pengumpulan kasus: 670 kasus adalah pasien rawat inap di rumah sakit kami dari bulan Januari hingga Oktober 2002. Semua kasus tidak menggunakan obat antivirus khusus seperti interferon, lamivudine, α1 thymidine, dll. dalam 3 bulan terakhir. Darah perifer dikumpulkan, serum diisolasi dan diuji pada hari yang sama atau disimpan pada suhu -20°C. 1.2 Penentuan HBV-M: Instrumen diagnostik imunoluminesensi otomatis AXSYMTM dari Abbott (AS), dengan reagen yang disediakan oleh Abbott sebagai reagen pendukung, dioperasikan oleh personel khusus. Mode pelaporan positif: HBsAg (S/N) ≥ 2,00; anti-HBs (Miu/ml) ≥ 10,00; HBeAg (S/CO) ≥ 1,00; anti-HBeAg (S/CO) ≤ 1,00; anti-HBc (S/CO) ≤ 1,00. 1.3 Penentuan kuantitatif HBV-DNA: Metode PCR kuantitatif fluoresensi waktu nyata digunakan. AcuGen System TMAG 9900 QRM Guantitation RoboMaster instrumen PCR kuantitatif otomatis sepenuhnya digunakan, dan reagen yang digunakan adalah reagen pendukung AcuGen System, yang disediakan oleh Perusahaan Shenzhen Baiyaktai (Biotronics). Sensitivitas deteksi adalah 5.0e4cps / ml. 1.4 Perlakuan statistik: Uji χ2 digunakan untuk perbandingan tingkat. 2 Hasil 2.1 Data kasus: total 670 pasien, 515 laki-laki dan 155 perempuan. Rasio laki-laki:perempuan adalah 3,3:1, dan usia berkisar antara 7 hingga 72 tahun, di mana 89,6% berusia 15-60 tahun (600/670). 2.2 Pola HBV-M: Ditemukan 14 pola HBV-M. 8 pola HBsAg-positif berjumlah 591 kasus, terhitung 88,2% dari jumlah total kasus (591/670), di mana pola 1,3,5 menyumbang 50,3% (297/591) dan pola 1,4,5 menyumbang 30,6% (181/591). 6 pola HBsAg-negatif berjumlah 64 kasus, terhitung jumlah total pola HBsAg-negatif adalah 9,6% (64/670) dari jumlah total kasus, termasuk 34,4% (22/64) untuk pola 2,4,5, 23,4% (15/64) untuk pola 4,5, dan 21,9% (14/64) untuk pola 2,5. 15 kasus benar-benar negatif untuk HBV-M. Tabel Hubungan antara HBV-M dan beban HBV-DNA Tabel 1 Hubungan antara penanda HBV dan jumlah HBV Penanda virus hepatitis B Jumlah kasus HBV-DNA load jumlah HBV (cps/ml) penanda HBV n ＜5.0e4(%) 5.0e4~4.9 e6(%) 5.0 e6~4.9 e8(%) ＞5.0 e8(%) (-) (+) (++) (+++) 1,3,5 297 8(2.7) 69(23.2) 124(41.8)△ 96(32.3)▲ 1,4,5 181 46(25.4) 67(37.0) 55(30.4)△ 13(7.2)▲ 1,3,4,5 67 4(6.0) 20(29.9) 35(52.2) 8(11.9) 1,5 23 6(26.1) 10(43.5) 4(17.4) 3(13.0) 1,2,3,5 11 1(9.1) 3(27.3) 4(36.4) 3(27.3) 1,2,4,5 9 1(11.1) 4(44.4) 3(33.3) 1(11.1) 1,2,3,4,5 2 1(50.0) 1(50.0) 1 1 1(100.0) 2,4,5 22 18(81.8) 3(13.6) 1(4.5) 2,5 14 12(85.7) 2(14.3) 2 5 4(80.0) 1(20.0) 2,4 1 1(100.0) 4,5 15 12(80.0) 1(6.7) 2(13.3) 5 7 5(71.4) 2(28.6) Negatif 15 14(93,3) 1(6,7) Total 670 132 186 186 226 126 * 1: HBsAg, 2: anti-HBs, 3: HBeAg, 4: anti-HBe, 5: anti-HBc. △: P < 0.05; ▲: P < 0.01 2.3 Beban HBV: di antara pola HBsAg-positif: Pola HBV-DNA positif HBeAg > 5,0e4cps/ml menyumbang 96,3% (363/377), analisis pola HBV-DNA negatif HBeAg > 5,0e4cps/ml menyumbang 74,8% (160/214). Beban HBV-DNA secara signifikan lebih tinggi pada pola HBeAg-positif daripada pola HBeAg-negatif (χ2 = 6,07, P<0,05). Untuk pola 1,3,5, HBV-DNA <5.0e4cps/ml hanya menyumbang 2.7%, sedangkan HBV-DNA >5.0e4cps/ml menyumbang 97.3% (289/297), dimana HBV-DNA >5.0e6cps/ml menyumbang 41. 8% (124/297) dan HBV-DNA >5.0e8cps/ml menyumbang 32.3% (96/297).1,4,5 Di antara pola-pola tersebut, HBV-DNA <5.0e4cps/ml menyumbang 25.4%, sedangkan HBV-DNA >5. 0e4cps/ml menyumbang 74,6% (135/181), di mana HBV-DNA >5,0 e6 cps/ml menyumbang 30,4% dan HBV-DNA >5,0e8 cps/ml hanya menyumbang 7,2%. 1 HBV-DNA load secara signifikan lebih tinggi pada pola 1,3,5 daripada pola 1,4,5 (P <0,01). e8 cps/ml; HBV-DNA <5,0e4 cps/ml menyumbang 83,3% (35/42) dari pola positif anti-HBs. Dalam 2 kasus, 5 penanda HBV-M hadir secara bersamaan. (lihat tabel) 3 Diskusi HBV-M dapat bermanifestasi dalam berbagai bentuk setelah infeksi HBV. Hasil penelitian ini mengungkapkan 14 pola antibodi antigenik. pola yang paling umum dari kepositifan HBsAg adalah pola 1,3,5 (43,0%). Di antara pola HBsAg-negatif, pola 1,5 (29,1%) dan pola 2,4,5 (27,8%) adalah yang paling umum, diikuti oleh pola 4,5 (19,0%) dan pola 2,5 (17,7%). Dan 2 kasus ditemukan positif untuk HBV-M. HBeAg adalah ekspresi mRNA dari daerah pre-C/C dari genom HBV dan terkait erat dengan HBV-DNA, sehingga biasanya individu yang positif HBeAg memiliki replikasi virus yang aktif dan sangat menular, sedangkan individu yang negatif HBeAg memiliki tingkat replikasi virus yang rendah dan kurang menular. Hasil penelitian kami juga menegaskan bahwa tingkat HBV-DNA pada pasien HBeAg-positif secara signifikan lebih tinggi daripada pasien HBeAg-negatif (P <0,05). Hal ini konsisten dengan sebagian besar laporan [1]. Namun, pada pola HBeAg-positif, masih ada 3,7% pasien dengan HBV-DNA <5,0e4 cps/ml, yang mungkin terkait dengan penekanan replikasi HBV oleh tekanan kekebalan organisme yang kuat atau karena integrasi HBV-DNA dalam darah ke dalam hepatosit. Pada pola negatif HBeAg, masih terdapat 74,8% pasien dengan HBV-DNA > 5,0e4 cps/ml dan bahkan 7,2% pasien dengan HBV-DNA > 5,0e8 cps/ml, yang mungkin terkait dengan mutasi gen HBV, terutama bila gen pre-C atau promotor gen C mengalami mutasi, antigen e sulit diekspresikan dan replikasi virus masih ada [2,3].
Hilangnya HBsAg dan produksi anti-HBs sebagian besar menyiratkan pemulihan infeksi HBV atau efek perlindungan dari vaksinasi hepatitis B organisme. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pada HBsAg negatif, pola anti-HBs positif, masih terdapat 16,7% pasien dengan HBV-DNA > 5,0e4 cps/ml, hanya saja tingkat virusnya sebagian besar tidak tinggi, yang mungkin terkait dengan rendahnya tingkat replikasi virus. Alasan untuk ini adalah: (i) jumlah antigen terlalu rendah untuk mencapai tingkat yang dapat dideteksi; (ii) itu ada sebagai kompleks antigen-antibodi, dan ketika antibodi dominan antigen ditutupi dan kit tidak sensitif dan tidak dapat dideteksi; (iii) varian gen HBV-S, di mana beberapa varian di wilayah hidrofilik utama tidak menghasilkan HBsAg [4]. Hal ini mungkin disebabkan oleh mutasi pada gen S yang mengkode HBsAg: kluster penentu “a” dari gen S adalah kluster penentu antigenik utama, dan substitusi asam amino tunggal yang dilestarikan di wilayah ini dapat mengubah antigenisitas HBsAg. Variasi dalam kluster penentu “a” mempengaruhi respons antibodi secara keseluruhan. HBsAg terdeteksi oleh reagen imunodiagnostik konvensional, dan anti-HB yang diproduksi oleh tubuh tidak dapat menetralkan HBV yang bermutasi, dan ada subtipe HBV yang berbeda dengan distribusi geografis dan polimorfisme dalam urutan kluster penentu “a” [5]. Dalam penelitian kami, kami menemukan bahwa pasien HBsAg negatif atau / dan anti-HBs positif memiliki infeksi HBV dalam sejumlah kecil serum, dan titer HBsAg dan HBeAg berkorelasi dengan tingkat HBV-DNA [6]. tingkat berkorelasi [6]. Selain itu, hasil tes anti-HBs mungkin terkait tidak hanya dengan sumber reagen tetapi juga perbedaan sumber vaksin hepatitis B yang diterima [7].
Proses replikasi virus juga disertai dengan ekspresi protein kemasan, dan protein heterolog (antigen) ini merangsang sistem kekebalan tubuh untuk menghasilkan antibodi yang sesuai. Dengan demikian, antibodi antigenik mencerminkan tingkat ekspresi virus dan, secara tidak langsung, tingkat replikasi virus. Metode serologis juga dapat digunakan untuk analisis etiologi hepatitis B (diagnosis etiologi), infektivitas, perkembangan penyakit dan prognosis. Namun, ekspresi HBV dan kekuatan respon imun tubuh dipengaruhi oleh beberapa faktor, dan ada kemungkinan bahwa indikator imunologi tidak sama persis dengan fenomena klinis dan viral load [8]. Karena meluasnya penggunaan inhibitor transkriptase terbalik HBV dan meluasnya varian virus, banyak fenomena klinis tidak dapat lagi sepenuhnya dijelaskan oleh indikator imunologis saja. Pengujian serologis bukanlah pengganti lengkap untuk pengujian HBV-DNA. Viral load adalah indikator yang lebih kuantitatif daripada serologi, dan mungkin lebih akurat dan sensitif daripada indikator serologis dalam mencerminkan fenomena klinis dan tren perubahannya. Namun, keduanya tidak dapat sepenuhnya menggantikan satu sama lain. Oleh karena itu, pengujian klinis HBV-M harus disertai dengan pengujian kadar HBV-DNA, dan kombinasi keduanya dapat menentukan penyakit dan prognosis dengan benar, jika hanya penekanan sepihak pada satu sisi yang bias.
Referensi
1 Kessler HH, Preininger S, Stelzl E, dkk. Identifikasi berbagai keadaan virus hepatitis B dengan uji PCR kuantitatif.
yang berbeda dengan uji PCR kuantitatif. Clin Diagn Lab Immunol 2000;7:298~300
2 Hunt CM, Mcgill JM, Allen MI, dkk. Relevansi klinis mutasi virus hepatitis B. Hepatologi 2000;31:1037~1044
3 Fujiwara K, Yokosuka O, Ehata T, dkk. Dua keadaan DNA virus hepatitis B yang berbeda pada
pembawa tanpa gejala: Hbe-antigen-positif versus anti-HBe -positif pembawa asimtomatik. Dig Dis Sci 1998;43:368~376
4 Luo, Anti-Sen, ed. Hepatitis B dasar dan klinis. Ed ke-2. Beijing: Rumah Penerbitan Kesehatan Rakyat, 2001, 334 ~ 335
5 Tong F.Y., Bai J.Y., Tang Y.H., dkk. Studi polimorfisme urutan gen S virus hepatitis B di Jiangsu selatan. Cina dan Barat
Jurnal Gabungan Penyakit Medis dan Hati, 2002;12(5):260~262
6 Shao W, Tong FY, Ruan CJ. Hubungan antara titer HBsAg dan HBeAg dengan kadar HBV-DNA. Gastroenterologi dan Hepatologi
Zhi, 2003;12(5):475~476
7 Heijtink RA, Schneeberger PM, Postma B, dkk. Kadar anti-HBs setelah imunisasi hepatitis B bergantung pada reagen uji: tingkat seroproteksi 10 dan 100IU / L yang ditentukan secara rutin tidak dapat diandalkan.
8 Weston SR, Martin P. Pengujian serologis dan molekuler pada virus hepatitis: pembaruan. can J
Gastroenterol,2001,15:177~184