Rintangan pertama: saluran reproduksi wanita: sperma harus melewati vagina, leher rahim dan masuk ke dalam rongga rahim sebelum mencapai tuba falopi, di mana mereka menunggu sel telur untuk membuahinya. Rintangan kedua: zigot sel telur betina: Zigot adalah lapisan sel granulosa yang berada tepat di luar sel telur dan terdispersi dalam asam hialuronat seperti gel, suatu mukopolisakarida yang dapat didegradasi oleh enzim hialuronidase, yang terkandung di dalam akrosom kepala sel sperma dan melarutkan zigot, sehingga membuka rintangan kedua. Hambatan ketiga: zona pellucida sel telur betina: setelah spermatozoon menembus oosit dan mencapai zona pellucida, akrosom kepala sperma mengandung enzim dengan komposisi yang berbeda, yang paling penting adalah enzim akrosom, dengan pelepasan enzim akrosom sperma, membran akrosom membentuk banyak lubang, dan pada saat yang sama, spermatozoa berikatan dengan zona pellucida. Reaksi akrosom melepaskan sejumlah besar enzim akrosom, yang mengubah struktur membran sel lempeng khatulistiwa kepala sperma, mempersiapkan peleburan membran sel sperma dan sel telur di masa depan. Oleh karena itu, integritas dan morfologi normal akrosom di kepala sperma penting untuk kontak timbal balik antara sperma dan sel telur. Hambatan keempat: membran sel telur sel telur betina Akrosom sperma melarutkan zona pellucida dan membutuhkan hambatan terakhir – membran sel telur. Kombinasi sperma dan sel telur menyebabkan serangkaian perubahan lokal pada membran sel telur, yang pada akhirnya menyebabkan terjadinya respons kortikal dan mencegah terjadinya pembuahan polisperma, dan pada saat yang sama, inti sperma dan inti sel telur bergabung untuk membentuk prokarion, yang akan membentuk sinkronisasi beberapa jam kemudian. Pada saat yang sama, inti sel sperma bergabung dengan inti sel telur untuk membentuk inti prokariotik, dan setelah beberapa jam, sinkritium terbentuk, dan pembuahan akhirnya selesai. Oleh karena itu, pH vagina, sifat lendir serviks, keberadaan antibodi anti-sperma, dan integritas morfologi akrosom sperma adalah faktor-faktor yang dapat mempengaruhi pembuahan.