Ultrasonografi 4D dilakukan antara usia kehamilan 5 dan 6 bulan, yaitu antara usia kehamilan 21 dan 25 minggu, sebaiknya antara usia kehamilan 22 dan 24 minggu. Pada saat ini, semua organ janin telah berkembang, panjang tubuhnya telah mencapai 30cm, diameter parietal dan pantatnya telah mencapai 21cm, dan beratnya telah mencapai 630g. Minggu yang paling cocok untuk USG 4D adalah kehamilan 22-24 minggu. Pada saat ini, beberapa organ janin belum sepenuhnya matang, dan USG 2D dapat dilakukan lagi pada usia kehamilan 32 minggu untuk memeriksa struktur janin secara sistematis untuk mengetahui adanya kelainan bentuk.