Ada dua indikator utama untuk diagnosis ankylosing spondylitis: pertama, pencitraan sendi sakroiliaka; dan kedua, pengukuran antigen leukosit manusia B27. Pertama, ankylosing spondylitis didiagnosis jika pasien mengalami perubahan pencitraan pada sendi sakroiliaka, seperti rontgen, film CT atau film MRI awal, yang menunjukkan artritis sakroiliaka bilateral tingkat 2 atau artritis sakroiliaka unilateral tingkat 3, dan jika pasien juga mengalami gejala nyeri punggung bawah atau nyeri pinggul dan tungkai yang bergantian dan disfungsi mobilitas punggung bawah. Kedua, pengukuran B27. Jika pasien memiliki riwayat keluarga dengan ankylosing spondylitis dan orang tua, kakek, nenek, kakek-nenek, atau saudara sedarah mereka telah didiagnosis dengan ankylosing spondylitis dan B27 mereka positif, bersama dengan adanya nyeri kaku punggung bawah dan nyeri pinggul dan tungkai yang bergantian, disfungsi mobilitas pinggang, dan radang sendi perifer, maka diagnosis memiliki ankylosing spondylitis dikonfirmasi.