Penggunaan klinis vitamin D₃ perlu digunakan di bawah bimbingan dokter, dosis pencegahan dapat diresepkan untuk penggunaan jangka panjang, tetapi untuk bayi dan anak kecil serta populasi khusus lainnya dapat mengonsumsi vitamin D₃ sejak lahir hingga usia dua minggu.
Vitamin D₃ dalam tubuh manusia terutama berperan dalam meningkatkan fosfor darah dan kalsium darah, dapat meningkatkan penyerapan kalsium usus, secara klinis digunakan dalam pencegahan dan pengobatan defisiensi vitamin D, tetapi juga dapat digunakan untuk hipokalsemia kronis, hipofosfatemia, rakhitis, tetani kekanak-kanakan dan osteochondritis dissecans dan penyakit lain dari pengobatan.
Vitamin D₃ dikontraindikasikan untuk mereka yang mengalami hiperkalsemia, hipervitaminosis D, hiperfosfatemia dengan rakhitis ginjal.
Penggunaan jangka panjang vitamin D₃ dapat menyebabkan sembelit, mual, muntah, kehilangan nafsu makan, kejang-kejang, aritmia jantung dan reaksi merugikan lainnya, terjadinya gejala-gejala di atas perlu segera dihentikan pengobatannya.
Untuk bayi cukup bulan biasanya mulai diminum dalam waktu 2 minggu setelah lahir, biasanya diminum sampai usia 2 tahun, dosis suplemen harian 400μg, orang lain jika perlu diminum dalam jangka panjang, dosis dan waktu minum yang spesifik harus di bawah bimbingan dokter.