Vitamin D3 meningkatkan penyerapan kalsium dan fosfor dalam tubuh, sehingga berperan dalam pencegahan dan pengobatan rakhitis, serta merangsang pengendapan osteoblas dan garam tulang, sehingga menghasilkan tulang yang lebih kuat. Oleh karena itu, vitamin D3 secara rutin diberikan sebagai suplemen untuk bayi dan remaja. Vitamin D3 juga memiliki peran penting dalam sistem kekebalan tubuh, mencegah infeksi dan berdampak pada penyakit autoimun, dll. Vitamin ini dapat bekerja pada glomerulus dan meningkatkan reabsorpsi kalsium, sementara itu dapat menghambat reabsorpsi fosfor oleh tubulus ginjal dan meningkatkan fosfor urin.