Kadar prolaktin serum (PRL) dipengaruhi oleh banyak faktor dan harus diukur pada pagi hari saat perut kosong. Jika kadar prolaktin kurang dari tiga kali batas atas normal, maka harus diuji setidaknya dua kali untuk menentukan apakah terdapat hiperprolaktinemia. Hiperprolaktinemia dapat dibagi menjadi tiga kategori tergantung pada penyebabnya: (a) Faktor fisiologis Kehamilan, menyusui, olahraga, tidur, hubungan seksual dan stres, semuanya dapat menyebabkan hiperprolaktinemia. PRL yang meningkat selama situasi stres seperti pembedahan terkait dengan tingkat stres dan akan kembali normal setelah stres dihilangkan. (ii) Faktor patologis Pada pasien dengan insufisiensi ginjal kronis, berkurangnya filtrasi glomerulus PRL dapat menyebabkan peningkatan moderat PRL serum. Sekitar sepertiga pasien dengan penyakit ginjal mengalami hiperprolaktinemia. Sekitar 20% pasien dengan hipotiroidisme memiliki kadar PRL yang sedikit meningkat, mungkin karena hipotiroidisme yang berkepanjangan atau pengobatan hipotiroidisme yang tidak memadai, yang mengakibatkan hiperplasia hipofisis, yang mengarah ke perubahan patofisiologis yang mirip dengan tumor hipofisis. Suplementasi hormon tiroid dapat mengurangi kadar PRL dan mengurangi ukuran kelenjar hipofisis hiperplastik. Tumor hipofisis non-fungsional yang lebih besar, lesi granulomatosa hipotalamus, craniopharyngiomas, pembedahan suprasellar, dan faktor lain yang menyebabkan kompresi tangkai hipofisis atau kerusakan neuron dopamin, yang mengakibatkan penurunan kadar dopamin yang mencapai sel prolaktin, dapat menyebabkan perkembangan hiperprolaktinemia, ketika kadar PRL biasanya berkisar dari 20μg/L hingga 100μg/L. Penggunaan agonis reseptor dopamin dapat mengurangi kadar PRL. Penyebab hiperprolaktinemia idiopatik tidak diketahui dan mungkin disebabkan oleh regulasi hipotalamus yang berubah. Diagnosis dapat ditegakkan hanya setelah faktor fisiologis, farmakologis, dan patologis lainnya disingkirkan. Kurang dari 10% pasien ini mungkin memiliki mikroadenoma prolaktin kecil yang tidak terdeteksi oleh pencitraan. Sekitar 30% pasien dengan hiperprolaktinemia idiopatik sembuh dengan sendirinya; 10%-15% mengalami peningkatan kadar PRL lebih lanjut; sisanya memiliki kadar PRL yang stabil. Karena homologi antara sel prolaktin dan sel hormon pertumbuhan, sekitar 50% pasien dengan akromegali mengalami hiperprolaktinemia; selain itu, karena GH memiliki efek prolaktinogenik yang sama dengan PRL, pasien dengan tumor hormon pertumbuhan mungkin memiliki tanda dan gejala yang mirip dengan mereka yang menderita prolaktinoma dan harus diskrining. Hiperprolaktinemia terdapat pada sekitar 30% pasien dengan sindrom ovarium polikistik. Patologi hipofisis lainnya, seperti hipofisis limfositik dan tumor TSH, juga dapat menyebabkan hiperprolaktinemia. （Banyak obat yang dapat meningkatkan sekresi PRL, misalnya, obat antipsikotik dapat meningkatkan kadar PRL dengan menurunkan kadar dopamin atau memusuhi efeknya. Obat-obatan lain seperti obat bius tertentu, antidepresan dan antihistamin juga dapat menyebabkan hiperprolaktinemia. Sebagian besar pasien dengan hiperprolaktinemia yang diinduksi obat memiliki PRL <150 μg/L. Penting untuk dicatat bahwa pencitraan hipofisis harus dilakukan bahkan jika kadar PRL hanya sedikit meningkat, karena prolaktinoma dapat hidup berdampingan dengan faktor lain yang menyebabkan hiperprolaktinemia.